Obtención de anticuerpos monoclonales de ratón contra proteasa de cisteína 5 recombinante de Entamoeba histolytica

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Autores

Juanita Trejos S Jhon Castaño O

Resumen

RESUMEN

Objetivo. Obtener anticuerpos monoclonales de ratón contra la proteasas de cisteína 5 (EhCP5) de Entamoeba histolytica. Materiales y métodos. Se inmunizaron ratones BALB/c por vía intraperitoneal con adyuvante de Freund completo e incompleto con la proteína recombinante EhCP5 obtenida a partir del cultivo de E.coli DH5α trasfectada con el vector recombinante pJC45 que expresa dicha proteína. Se seleccionó el animal con mejor respuesta de anticuerpos. Al cual se le extrajo su bazo como fuente de linfocitos B, los cuales se fusionaron utilizando PEG con células de mieloma de ratón SP2-0/Ag14. Se procedió a selección de los hibridomas y a la evaluación de los sobrenadantes de las colonias que crecieron a los 7 días mediante ELISA. Los hibridomas con valores más altos de anticuerpos específicos contra la proteína EhCP5r se seleccionaron, y los clones obtenidos por diluciones limitantes fueron expandidos. Resultados. A partir de un clon secretor estable se purifico el anticuerpo monoclonal anti EhCP5r del isotipo IgG1 por cromatografía de afinidad con proteína G. Los clones fueron expandidos in vivo e in vitro. Con el anticuerpo purificado se diseñaron tres sistemas de captura para evaluar la aplicabilidad del anticuerpo monoclonal anti EhCP5r como método inmunodiagnóstico. Conclusiones. Se logro la producción de un anticuerpo monoclonal específico contra EhCP5r que permite diferenciar Entamoeba histolytica de Entamoeba dispar.

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Referencias

1. Samie A, Obi L, Bessong P, Stroup S, Houpt, Guerrant R. Prevalence and species distribution of E. histolytica and E. dispar in the venda region, limpopo, South Africa. Am J Trop Med Hyg 2006; 75:565-71.

2. Amin J. Seasonal prevalence of intestinal parasites in the United States. J Trop Med Hyg 2000; 66: 799-803.

3. Haque R, Petri WA. Diagnosis of amebiasis in Bangladesh. Arch Med Res 2006; 37:273-6. http://dx.doi.org/10.1016/j.arcmed.2005.09.001

4. Mora L, García A, De Donato M. Prevalencia del complejo Entamoeba histolytica/ Entamoeba dispar en pacientes con síntomas gastrointestinales de diarrea procedentes de Cumaná, Estado Sucre. Kasmera 2005; 33:36-45.

5. Botero D, Restrepo M. Parasitosis humanas. 4ta ed. Medellín: Corporación para Investigaciones Biológicas, CIB; 2003.

6. Agudelo-Lopez S, Gómez-Rodríguez L, Coronado X, Orozco A, Valencia-Gutierrez C, Restrepo-Betancur L et al. Prevalencia de parasitosis intestinales y factores asociados en un corregimientode la Costa Atlántica Colombiana. Rev Salud Pública 2008;10:633-42. http://dx.doi.org/10.1590/S0124-00642008000400013

7. Gallego ML, Gómez-Marín JE, Torres E, Lora F. Prevalencia de Entamoeba histolytica en asentamientos temporales post-terremoto de la ciudad de Armenia. Infectio 2003; 7:190-94.

8. Tanyuksel M, Petri WA Jr. Laboratory diagnosis of amebiasis. Clin Microbiol Rev 2003; 16:713-29. http://dx.doi.org/10.1128/CMR.16.4.713-729.2003

9. Fonte-Galindo L. Amebiasis: enfoques actuales sobre su diagnóstico, tratamiento y control. La Habana Cuba: Editorial Elfos Scientae; 2000.

10. Fotedar R, Stark D, Beebe N, Marriott D, Ellis J, Harkness J. Laboratory Diagnostic Techniques for Entamoeba Species. Clin Microbiol Rev 2007; 20:511-32. http://dx.doi.org/10.1128/CMR.00004-07

11. Espinosa-Cantellano ME, Martínez-Palomo AM. Pathogenesis of intestinal amebiasis: from molecules to disease. Clin Microbiol Rev 2000; 13:318-31. http://dx.doi.org/10.1128/CMR.13.2.318-331.2000

12. Coudrier E, Amblard F, Zimmer C, Roux P, Olivo-Marin JC, Rigothier MC, et al. Myosin II and the Gal-GalNAc lectin play a crucial role in tissue invasion by Entamoeba histolytica. Cell Microbiol 2005; 7:19-27. http://dx.doi.org/10.1111/j.1462-5822.2004.00426.x

13. Tillack M, Nowak N, Lotter H, Bracha R, Mirelman D, Tannich E, et al. Increased expression of the major cysteine proteinases by stable episomal transfection underlines the important role of EhCP5 for the pathogenicity of Entamoeba histolytica. Mol Biochem Parasitol 2006; 149:58–64. http://dx.doi.org/10.1016/j.molbiopara.2006.04.009

14. Singh A, Houpt E, Petri WA.Rapid Diagnosis of Intestinal Parasitic Protozoa, with a Focus on Entamoeba histolytica. Interdiscip Perspect Infect Dis 2009; 2009:547090.

15. Clark CG, Diamond LS. Methods for cultivationof luminal parasitic protists of clinical importance. Clin Microbiol Rev 2002; 15:329-41. http://dx.doi.org/10.1128/CMR.15.3.329-341.2002

16. Vázquez-Echeverría Cl, Zavala Gl, Chávez B, Echeverría-Martínez OM, Vázquez-Nin GH, Segura-Valdez MLs, et al. Evidencia ultraestructural del nucléolo de Entamoeba histolytica. Tip Revista Especializada en Ciencias Químico-Biológicas 2009; 12:34-37.

17. Shire SJ, Gombotz W, Bechtold-Peters K, Andya J. Current Trends in Monoclonal Antibody Development and Manufacturing. New York: American Association of Pharmaceutical Scientists; 2010.

18. Machado NP, Téllez GA, Casta-o JC. Anticuerpos monoclonales:desarrollo físico y perspectivas terapéutica. Infectio 2006; 10:186-19.

19. Jevey-González A, Hernández-González SM, Nápoles-Vega A, Pedrosa-Amado A, Ramírez-Zayas R. Obtención, purificación y caracterización de IgG policlonal de conejo anti-Lipoproteína (A) humana. Archivo Médico de Camagüey 2005; 9:1-10.

20. Haque R, Mollah NU, Ali IK, Alam K, Eubanks A, Lyerly D, et al. Diagnosis of amebic liver abscess and intestinal infection with the TechLab Entamoeba histolytica II antigen detection and antibody tests. J Clin Microbiol 2000; 38:3235-9.

21. Haghighi A, Rezaeian M. Detection of serum antibody to Entameba histolytica in various population samples of amebic infection using an enzyme-linked immunosorbent assay. Parasitol Res 2005; 97:209-12. http://dx.doi.org/10.1007/s00436-005-1418-3

22. Pillai DR, Kain KC. Recent developments in amoebiasis:the Gal/GalNAc lectins of Entamoeba histolytica and Entamoeba dispar. Microbes Infect 2000; 2:1775-83 http://dx.doi.org/10.1016/S1286-4579(00)01330-7

23. Zeehaida M, Wan Nor Amilah WA, Amry AR, Hassan S, Sarimah A, Rahmah N.A study on the usefulness of Techlab Entamoeba histolytica II antigen detection ELISA in the diagnosis of amoebic liver abscess (ALA) at Hospital Universiti Sains Malaysia (HUSM), Kelantan, Malaysia. Trop Biomed 2008; 25:209-16.

24. Haghighi A, Rezaeian M.Detection of serum antibody to Entameba histolytica in various population samples of amebic infection using an enzyme-linked immunosorbent assay. Parasitol Res 2005; 97:209-12. http://dx.doi.org/10.1007/s00436-005-1418-3

25. Reyes L, León R. Diferenciación de Entamoeba histolytica/Entamoeba dispar y los nuevos hallazgos en la patogénesis de la amebiasis intestinal. Rev Costarric Cienc Méd 2002; 23:161-73.

26. Klemba M, Goldberg DE. Biological roles of proteases in parasitic protozoa. Annu Rev Biochem 2002; 71:275-305. http://dx.doi.org/10.1146/annurev.biochem.71.090501.145453

27. Ferreira JH, Gentil LG, Dias SS, Fedeli CE, Katz S, Barbiéri CL. Immunization with the cysteine proteinase Ldccys1 gene from Leishmania (Leishmania) chagasi and the recombinant Ldccys1 protein elicits protective immune responses in a murine model of visceral leishmaniasis. Vaccine 2008; 26:677-85. http://dx.doi.org/10.1016/j.vaccine.2007.11.044

28. Que X, Reed SL. Cysteine proteinases and the pathogenesis of amebiasis. Clin Microbiol Rev 2000; 13:196-206. http://dx.doi.org/10.1128/CMR.13.2.196-206.2000

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